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      小愛科普: 多肽的保存及溶解

      發布時間:2020-11-26      點擊次數:2984

      一. 多肽的保存
       

      多肽保存:如果以凍干粉形式的多肽,經密封包裝可在常溫條件下穩定運輸,但是溶解狀態的多肽不宜長期保存。

      保存:所以需要長期保存的多肽,應以凍干粉形式存放在含有干燥劑的密封容器內,置于-20°C保存,-80°C效果更好,可以大限度地避免多肽降解,避免了被細菌降解和氧化,也可以避免二級結構的形成。大多數肽用這種儲存方式可以使多肽保存半年以上,穩定性差一些的多肽一般也可以保存3個月以上。

      打開包裝: 在打開包裝和稱重前,請先將多肽在干燥器中平衡至室溫。因多肽往往具有吸濕性,未經平衡到室溫的多肽在打開蓋子后易凝結,從而降低了多肽產品的穩定性。

      稱重: 迅速稱取您所需的多肽,并將剩余多肽繼續儲存在-20°C或更低溫度。當無法冷凍干燥時,比較好的方法是分裝成較小的樣量存放,分批次取用,并盡快使用。

      其他:含Met,Cys,Trp,Gln或Asn的多肽容易降解,所以相對于其他不含此類氨基酸的多肽,其保存期較短,尤其是N末端為Gln,建議盡快使用。


      二.多肽的溶解

      溶解多肽是一個很重要的環節。如果溶解不當可能導致肽損失或者實驗失敗。肽的溶解性主要取決于肽的序列,所以,設計多肽時要加注意,肽序列中建議應包含20%的帶電殘基以增加其溶解度。   

      在使用之前,客戶可以遵循以下三個基本原則來選擇合適的溶劑溶解多肽。

      首先,所選溶劑一定能充分溶解多肽;其次,所選溶劑能與實驗條件兼容;后,所選溶劑不能與肽反應,也不能使肽降解。

      只要肽的量允許,可以先用少部分肽溶解,然后再將全部樣品溶解。如果需要從溶劑中回收肽,可以選擇 一種初始溶劑使其在凍干后容易去除。   


      以下建議或許對您溶解肽有所幫助:   

      1. 少于5個氨基酸的肽一般溶于水溶液,強疏水的氨基酸(W,I,L,F,M,V,Y)除外。   

      2. 如果帶電氨基酸平均分布于全部序列中,那么含有>25%帶電氨基酸(E,D,K,R,H)的親水肽和含有<25%疏水氨基酸的肽一般都能溶于水溶液。多肽的純化系統一般為0.1%TFA/水和0.1%TFA/ ACN。因此,如果肽溶解在沒有緩沖能力或者緩沖能力很弱的緩沖液中,結果可能導致肽溶液呈酸性。在使用別的方法溶解肽時務必使溶劑的pH值近乎中性。酸性肽(E+D殘基數多于K+R+H殘基 數)和堿性肽(K+R+H殘基數多于E+D殘基數)在中性pH值條件下比在酸性pH值下更易于溶解?! ?/span>

      3. 對于疏水氨基酸含量為50%~75%的肽,即使序列中含有>25%帶電氨基酸也有可能不溶于水或者部分溶解。先把肽溶于少量的強有機溶劑如DMF、ACN、異丙醇、乙醇、乙酸、4-8M GdnHCl、 尿素,或者DMSO(序列中沒有C,W,M時),及其它類似的有機溶劑中。將溶解肽的有機溶 劑緩慢地逐滴加入水溶液中,如果溶液變渾濁,可能是達到了溶解極限,繼續溶解就沒什么用了。 需要注意的是,開始選擇的溶劑應該與實驗系統兼容。   

      4. 疏水氨基酸含量>75%的強疏水肽一般也不溶于水溶液。此類肽也應該先用強有機溶劑(如TFA,甲酸)溶解,如果將其加入到水溶液中也可能產生沉淀。后的肽溶液可能需要高濃度的有機溶劑使之變性,而有機溶劑一般不用于活細胞的生物功能研究。   

      5. S,T,E,D,K,R,H,N,Q,Y含量高(>75%)的多肽序列容易形成多余的分子間氫鍵網絡, 在濃的水溶液中容易形成凝膠。此類肽可以用步驟3所述方法溶解。為了減少溶解中可能出現的問題,建議客戶從設計上和序列上多加考慮,以改善肽的溶解度。


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