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      細胞養得好,血清有門道

      發布時間:2023-08-24      點擊次數:171

      血清是細胞培養的必要成分之一,胎牛/新生牛/小牛/成牛種類繁多,加上市場上各種品牌,讓細胞小白挑花了眼,小愛圍繞以下問題帶您一站式了解。

       

      ? 血清為何對細胞狀態影響如此之大?
      ? 血清到底如何挑選?
      ? 絮狀物、沉淀、過濾、滅活等使用常見問題?
      ? 細胞出現問題如何判斷是否與血清有關?

       

      一、血清為何對細胞狀態影響如此之大?

       

      血清中含有多種已知和未知的成分,主要包括:蛋白質和多態、多種因子、氨基酸、激素、其他微量元素及不確定成分。其中生長因子促進細胞增值,附著因子促進細胞貼壁并具有抗胰酶活性,各種蛋白質可提供細胞生長所必需的營養物質,礦物質、脂類及激素也可以結合于血清的蛋白質中,由此可見血清在細胞培養過程中十分關鍵,其本身存在多種未知成分,采血時間差異,批次之間差異等,綜合決定了血清對細胞狀態的影響程度。

       

      根據動物來源不同,血清可分為馬血清、牛血清、豬血清,還有羊、雞、兔等動物來源的血清,根據采血時間、血緣品質又分為不同類別,加之不同工藝的加工,市面上可見的血清種類繁多。


      愛必信血清

       

      通常馬血清用于神經細胞的培養,豬血清用于疫苗生產,新生牛作為乳制品產業中的副產品,其血清產量更高、效益更好,適用細胞范圍也更廣。

       

      為什么胎牛血清比新生牛血清貴?隨著胎齡的增長,補體系統逐漸發育,各種生長因子逐漸減少,進食后的小牛血清中IgG含量增多,使血清隨著采血時間后移質量相對下降,而且每頭胎牛僅能獲得約500ml血清,種種因素使得胎牛血清成為細胞培養的血清,價格也相對更加昂貴。為了滿足不同實驗需求,產生了適合外泌體研究的去外泌體血清,適合脈沖示蹤實驗的透析胎牛血清等等,而不同的生產工藝產生了特級、優級、標準級血清。

       

      牛血清根據采血時間不同分類表


      類別

      來源

      胎牛血清

      對孕期母牛腹腔穿刺獲取

      新生牛血清

      出生 4-6h 內未進食進水的新生牛靜脈采血

      小牛血清

      出生后 10-90d 的小牛靜脈采血

      成年牛血清

      出生超過 6個月 的牛靜脈采血




       

      判斷血清質量的四個指標:依據《中國生物制品主要原輔料質控標準2000年版》

       

      ? 有害微生物,不能含有牛腹瀉病毒,不能被噬菌體、支原體、真菌污染;
      ? 內毒素,不應高于10 EU/ml;
      ? 總蛋白含量,3.5%~5%(w/V),過高可能是由于采血時間較晚,過低血清可能被人為稀釋;
      ? 血紅蛋白,從一定程度上反映了采集流程的規范程度。不應高于0.02% (w/V)。

       

      此外還流傳著通過顏色判斷血清質量的方法,小愛認為不夠科學,血清顏色由是血紅蛋白(紅)和膽紅素(黃)決定,胎牛尚未發育好,因此其凝血功能不完善,所以采集血清時溶血不可避免,根據血紅蛋白是否超標來判斷采血過程的規范性更為精準。

       

      二、絮狀物、沉淀、過濾、滅活等使用常見問題?

       

      我們推薦大家養成先4℃解凍,室溫或37℃融解的方法,由于蛋白質等干物質的融解速度大于水這類溶劑,所以我們在血清融解過程中最好多次混勻,避免大量蛋白融于極少部分水,而產生蛋白沉淀。

       

      如果融解血清時出現沉淀也不要著急,產生的沉淀多為脂蛋白和纖維蛋白,血清中這些物質的含量遠遠高于細胞生長需求,所以并不影響后續細胞培養效果,血清打開后分裝使用,避免反復凍融可以降低出現沉淀的概率,遇到血清沉淀的情況我們可以嘗試延長融解時間或者離心去除沉淀。


      血清融解產生的沉淀(圖片來源于網絡,僅供學習使用)

       

      此外血清在生產時經過多次過濾除菌,有些血清還經過輻照滅菌,所以在一般無需過濾。熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質,但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要,補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出,其他的補體成分也很少。

       

      三、細胞出現問題如何判斷是否與血清有關?

       

      主要看是否更換了新批次的血清,不同批次的血清成分可能有一定程度的改變,所以推薦購買血清時多囤幾瓶同批次的,更換批次后,一定要注意觀察細胞狀態。

       

      四、血清批間差會造成細胞哪些改變呢?

       

      主要表現為增長變慢,細胞邊界不清,形態改變,空泡化,貼壁能力減弱,漂浮,凋亡增多等。


       

      血清批間差造成的細胞聚團、形態改變、空泡化

       

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      貨號

      品名

      應用

      abs981

      胎牛血清(特級)

      適合各類細胞,特別是干細胞、原代細胞等血清依賴度高的細胞

      abs972

      胎牛血清(優級)

      適用于特異抗體要求較高產品、較貴細胞、種細胞培養與封閉

      abs973

      胎牛血清(優級),輻照

      適用于特異抗體要求較高產品、較貴細胞、種細胞培養與封閉

      abs974

      胎牛血清(標準級)

      適用于正常封閉與增殖旺盛的常規細胞系的培養

      abs975

      胎牛血清(標準級),輻照

      適用于正常封閉與增殖旺盛的常規細胞系的培養等。

      abs977

      新生牛血清(特級)

      適用于特異抗體要求較高產品、較貴細胞及活疫苗產品生產

      abs978

      新生牛血清(優級)

      適用于細胞培養、疫苗產品生產、正常封閉等。

      abs991

      成牛血清(標準級)

      適用于正常封閉和體外診斷試劑等。






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