<bdo id="d1vsz"></bdo>

  • <track id="d1vsz"></track>

      全國服務咨詢熱線:

      Products產品中心
      首頁 > 產品中心 > 常規生化試劑 > 免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒 > abs955免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒

      免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒

      簡要描述:免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒是基于抗體和蛋白的特異性親和作用,通過捕獲與蛋白或抗原特異性結合的抗體,進而從復雜的樣品中捕獲及富集目標蛋白,同時可以測定與之相互作用的蛋白或其它生物大分子。

      • 產品型號:abs955
      • 廠商性質:生產廠家
      • 更新時間:2023-03-30
      • 訪  問  量:700

      詳細介紹

      品牌absin貨號abs955
      供貨周期現貨應用領域生物產業

      免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒簡介:免疫(共)沉淀(IP/CoIP)是基于抗體和蛋白的特異性親和作用,通過捕獲與蛋白或抗原特異性結合的抗體,進而從復雜的樣品中捕獲及富集目標蛋白,同時可以測定與之相互作用的蛋白或其它生物大分子。
      實驗前:為了獲得更好的實驗結果,所有的步驟均需要根據實際情況進行優化。
      例如:根據細胞系或被捕獲的抗原后續用途的不同可選擇更加合適的細胞裂解條件。對于沒有細胞壁結構的哺乳動物細胞,可以直接使用去污劑進行裂解,但其它細胞,則需要一些機械剪切力輔助,例如超聲破碎。以下列出的(包括裂解液、孵育時間、體積及濃度)是作為初始嘗試的條件建議,最終的優化需要根據實際情況調整。
      另外,細胞裂解物在進行免疫(共)沉淀前,可先進行蛋白免疫印跡法檢測,以此來確定細胞裂解物里存在目標蛋白。
      一、免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒試劑盒組分

      試劑名稱體積保存條件
      Lysis buffer30ml4 ℃
      10*Wash buffer50ml4 ℃
      1*SDS 樣品緩沖液1ml4 ℃
      Protein A 瓊脂糖珠250ul4 ℃
      Protein G 瓊脂糖珠250ul4 ℃

       注: Lysis buffer 使用前,立刻加入 1 mM PMSF(推薦購買abs9146,自行配制)。二、使用方法


      A. 制備細胞裂解物
      1. 吸干培養基。添加含有調節分子的新鮮培養基,使其在預定的時間內對細胞進行處理。
      2. 收集細胞,去除培養基后用冰預冷的 1 X PBS 洗滌細胞一次。
      3. 去除 PBS 并在每個細胞板上(10 cm)加入 0.5 ml 冰預冷的 Lysis buffer,并在冰上孵育至少5分鐘。
      4. 從板上刮下細胞,把提取物轉移至微量離心管。置于冰上。
      5. 在冰上進行 3 次超聲破碎,每次 5 秒。(PS:超聲條件需根據液體量、探頭直徑以及最大功率調整。以200W功率超聲儀器為例,用 3 mm 的探頭。我們一般推薦使用 35%-40% 的最大功率進行 3 次超聲脈沖, 每次超聲之間停頓 10 秒。)
      6. 在 4 °C,在 14,000 x g 條件下,微量離心10分鐘,將上清轉移到新管中。上清液即為細胞裂解物。如有必要,裂解物可保存在 -80 °C。
      注:細胞裂解物制備好之后,可先進行蛋白免疫印跡法檢測,以此來確定細胞裂解物里存在目標蛋白。
      B. 免疫沉淀法
      a) 細胞裂解物預清除(可選步驟)
      1. 向 500 μl(含總蛋白 200 -1000 ug)細胞裂解物中添加 5 μl Protein A 和 5 μl Protein G。
      2. 在 4 °C 下,旋轉孵育 30 - 60 分鐘。
      3. 4°C 條件下 12000g 離心1分鐘,保留上清,待用。
      b) 抗原抗體結合
      1. 在新的離心管內加入 500 μl (含總蛋白 200 – 1000 ug)細胞裂解物(可以是預清洗后的細胞裂解物)。
      2. 加入目標蛋白的單克隆/多克隆抗體(1 – 5 μg)。
      3. 同時采用非特異免疫的同源抗體作為對照。
      4. 在 4 °C 輕柔混合過夜。
      c) 免疫復合物沉淀
      1. 抗體孵育過夜后,加入 5 μl Protein A 和 5 μl Protein G。
      2. 在 4 °C 溫和地混勻1- 3小時或過夜。
      3. 12,000 g 離心1 分鐘,保留沉淀。
      4. 使用 0.5 ml 1*Wash buffer 清洗沉淀,12,000 g 離心1分鐘,保留沉淀。
      5. 重復第4步,共計清洗3次。
      注:清洗,去上清的時候需要注意避免吸走填料
      C. 用蛋白免疫印跡法進行分析
      1. 在 20 - 40 μl 1*SDS 樣品緩沖液中重懸沉淀物,渦旋振蕩,然后再微量離心30秒,以使附著管壁的珠子和液體到管底。
      2. 將樣品加熱至 95 - 100 °C 并持續2 - 5分鐘,然后在 14,000 g下瞬時離心1分鐘,取上清液。
      3. 將樣品(15 – 30 μl)上樣到 SDS-PAGE 凝膠上。
      4. 用蛋白質印跡法分析樣品。三、試劑盒保存方法本試劑盒4℃保存,1年有效。
      注意:Protein A和Protein G的基質為20%乙醇,較易揮發,使用時應注意密封,如出現揮發情況,可使用20%乙醇重懸。

       

      溫馨提示:本產品僅作科研實驗使用,不支持臨床等研究


      產品咨詢

      留言框

      • 產品:

      • 您的單位:

      • 您的姓名:

      • 聯系電話:

      • 常用郵箱:

      • 省份:

      • 詳細地址:

      • 補充說明:

      • 驗證碼:

        請輸入計算結果(填寫阿拉伯數字),如:三加四=7
      愛必信(上海)生物科技有限公司
      地址:上海市浦東新區新浩路58號申江科創園18棟
      郵箱:info@absin.cn
      傳真:
      關注我們
      歡迎您關注我們的微信公眾號了解更多信息:
      歡迎您關注我們的微信公眾號
      了解更多信息
      {成人区人妻精品一区二区三区,老牛传媒免费观看MV,亚洲成A∨人片在线观看无码,国产色婷婷精品综合在线}
      <bdo id="d1vsz"></bdo>

    1. <track id="d1vsz"></track>

        掃一掃訪問手機站掃一掃訪問手機站
        訪問手機站