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      免疫印迹及免疫沉淀用裂解液

      简要描述:Western及IP细胞裂解液,是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀和免疫共沉淀。使用本裂解液时,用户可以根据具体用途自行添加特定抑制剂或者不添加抑制剂。

      • 产品型号:abs9239
      • 厂商性质:生产厂家
      • 更新时间:2023-07-27
      • 访  问  量:156

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      详细介绍

      品牌absinCAS-
      分子式-纯度-
      分子量-货号abs9239
      规格100ml供货周期现货
      主要用途用于PAGE,Western,免疫沉淀和免疫共沉淀应用领域化工,生物产业

      产品描述:

      Western及IP细胞裂解液,是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀和免疫共沉淀。使用本裂解液时,用户可以根据具体用途自行添加特定抑制剂或者不添加抑制剂。Western及IP细胞裂解液的主要成分为Tris-HCl,NaCl,去垢剂。可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。

      使用本裂解液获得的蛋白样品,如果用于酶活性检测或一些生物小分子的检测,需要测试标准品用本裂解液稀释后是否会显著影响标准曲线。如果本裂解液对于标准曲线无显著影响,则可以使用本裂解液。用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品,可用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂等干扰物质,不能用Bradford法测蛋白浓度。 


      使用方法:

      1、对于培养细胞样品
      (1)取适当量的裂解液,根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。
      (2)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 100~200uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1~2sec 后,细胞就会被裂解。
      (3)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100~200uL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 5~10×105 细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
      (4)充分裂解后,10000~14000g离心3~5min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀、酶或生物小分子检测等操作。
      注:裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加100uL 裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量至 150uL 或 200uL。
      2、对于组织样品
      (1)取适当量的裂解液,根据需要自行确定添加适当的抑制剂或不添加抑制剂。
      (2)把组织切成细小的碎片。
      (3)按照每 20mg 组织加入 100~200uL 裂解液的比例加入裂解液。
      (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
      (4)用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
      (5)充分裂解后,10000~14000g 离心 3~5min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
      (6)如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。


      注意事项:

      1、若频繁使用本品,可以短期4℃保存。若不是频繁使用本品,建议第一次使用本品的时候将裂解液分装冻存,避免反复冻融。
      2、若需添加蛋白酶或磷酸酶抑制剂,可使用我司的广谱蛋白酶抑制剂混合物(abs9161),广谱磷酸酶抑制剂混合物(abs9162),以及PMSF,或者自行准备。
      3、裂解样品的所有步骤需在冰上或4℃进行。
      4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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